溶劑純度與兼容性把控：優先選用色譜純級溶劑（如甲醇、乙腈），避免使用分析純溶劑中的雜質污染色譜柱或影響檢測基線；配制流動相時，需確認溶劑間的兼容性（如避免強極性溶劑與非極性溶劑混合時產生分層），且嚴格控制 pH 值（如反相色譜柱通常要求 pH 2-8），超出范圍需用緩沖液調節，防止損傷色譜柱固定相。

流動相脫氣與過濾：每次配制流動相后，必須通過超聲脫氣（脫氣時間 15-20 分鐘）或在線脫氣機去除溶解氧，避免氣泡進入泵體導致壓力波動、基線噪聲增大；同時用 0.22μm（有機相用尼龍膜、水相用混合纖維素膜）濾膜過濾流動相，去除微小顆粒雜質，防止堵塞色譜柱入口或單向閥。

色譜柱與進樣針檢查：查看色譜柱標簽，確認與檢測方法匹配（如分析極性化合物選用反相色譜柱、分析離子型化合物選用離子交換色譜柱），并檢查色譜柱兩端接頭是否擰緊、柱芯是否有漏液痕跡；進樣針需檢查針尖是否彎曲、堵塞，若有需更換新針，避免損壞進樣閥或導致進樣量不準。

設備部件狀態確認：檢查輸液泵的溶劑瓶內液位（需高于泵入口濾頭，避免吸入空氣），確認溶劑管路無彎折、破損；打開檢測器光源（如紫外檢測器的氘燈）預熱前，查看光源使用時間（通常氘燈壽命為 2000-3000 小時，接近壽命需提前備用）；檢查廢液桶是否已滿，及時清空避免廢液溢出污染設備。

梯度洗脫平穩過渡：若采用梯度洗脫程序，需設置合理的梯度變化速率（如有機相比例每分鐘變化不超過 10%），避免溶劑組成驟變導致色譜柱壓力劇烈波動，損傷固定相；梯度結束后，需用初始流動相平衡色譜柱（平衡時間為柱體積的 5-10 倍），確保下次檢測時色譜柱狀態一致。

進樣操作精準規范：手動進樣時，需先用樣品溶液潤洗進樣針 3-5 次（每次潤洗體積為針容量的 1/3），避免樣品殘留導致交叉污染；進樣時動作緩慢平穩，將針芯推至 “定量環滿量程" 位置后停留 1-2 秒再拔出，確保進樣量準確；自動進樣時，需確認樣品瓶內樣品量充足（高于進樣針取樣高度），并檢查樣品盤是否放置平穩，避免進樣針碰撞樣品瓶。

壓力與基線監控：運行過程中每 10 分鐘記錄一次輸液泵壓力，若壓力突然升高（超過正常壓力 20%），可能是色譜柱堵塞或管路堵塞，需立即停止運行，用純溶劑反向沖洗色譜柱或檢查管路；若基線出現異常漂移（如紫外檢測器基線漂移超過 0.005AU/h），需檢查流動相是否污染、檢測器光源是否穩定，或環境溫度是否波動（需控制實驗室溫度在 20-25℃，濕度 40%-60%）。

樣品與數據管理：檢測過程中，樣品瓶需按編號有序擺放，避免混淆；每批樣品需隨行空白樣品與標準品，用于驗證檢測系統適用性（如標準品峰形對稱、分離度≥1.5）；實時查看色譜圖，若出現峰形拖尾、分裂等情況，需暫停檢測，排查是否因色譜柱污染（需用強溶劑沖洗）或流動相 pH 值不當導致。

色譜柱針對性清洗：根據檢測樣品特性選擇清洗溶劑，分析完高濃度樣品或含強保留物質（如蛋白質、油脂）后，需用專用清洗溶劑沖洗色譜柱（如反相色譜柱用甲醇 - 水（90:10）沖洗 30 分鐘，再用純甲醇沖洗 20 分鐘），去除柱內殘留物質，防止固定相老化；長期不用的色譜柱，需用儲存溶劑（如反相柱用純甲醇、正相柱用正己烷）封存，兩端用堵頭擰緊，避免柱芯受潮或污染。

管路與進樣閥清潔：關機后用純溶劑（如甲醇）沖洗輸液泵管路與進樣閥（沖洗體積為管路體積的 3-5 倍），去除殘留流動相，防止鹽類物質結晶堵塞管路；進樣閥需切換至 “清洗" 模式，用溶劑反復沖洗進樣口，避免樣品殘留腐蝕閥體。

檢測器與軟件操作：關閉檢測器光源前，需先關閉檢測軟件中的數據采集功能，避免光源突然熄滅導致軟件報錯；關閉輸液泵后，需將溶劑管路從溶劑瓶中取出，用壓縮空氣吹凈管路內殘留溶劑，再將管路放入純甲醇中（防止管路內水分結冰或滋生微生物）。

設備外部與環境清潔：用無塵布擦拭設備外殼，去除溶劑殘留與粉塵；清理進樣區臺面，將進樣針、樣品瓶等耗材分類收納；檢查實驗室通風系統是否正常，確保溶劑揮發氣體及時排出，保護操作人員健康與設備部件。

短期維護（每周 1 次）：清洗在線脫氣機的過濾器，檢查輸液泵單向閥是否堵塞（若壓力波動大，可拆下單向閥用甲醇超聲清洗）；校準進樣針的進樣量（用天平稱量進樣體積，誤差需控制在 ±1% 以內）。

長期維護（每月 1 次）：更換輸液泵的密封墊（避免密封老化導致漏液），檢查色譜柱柱效（用標準品測定理論塔板數，若柱效下降超過 30% 需更換色譜柱）；清潔檢測器流通池（用甲醇超聲清洗，去除池內殘留污染物，恢復檢測靈敏度）。

操作與維護記錄：建立設備使用檔案，詳細記錄每次使用的檢測項目、樣品信息、流動相組成、色譜柱型號、關鍵參數（壓力、溫度、基線噪聲）等；每次維護后記錄維護內容、更換部件型號（如氘燈、密封墊）、維護人員與時間，便于追溯設備故障原因與維護周期。

耗材與備件管理：定期盤點色譜柱、溶劑、進樣針等耗材庫存，確保常用耗材有備用（如備用色譜柱、0.22μm 濾膜）；建立備件清單，標注關鍵部件（如氘燈、單向閥）的更換周期與供應商信息，避免設備故障時因缺少備件導致停機。